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INT即硝基四紫唑，BCIP即5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐。当二者存在时，在碱性磷酸酶(AP)作用下，BCIP会被水解产生强反应性的产物，该产物会和INT发生反应，形成显微镜下可见的棕红色或橘黄色沉淀。常用于免疫组化、原位杂交和Western Blot等膜显色或细胞组织内源性的碱性磷酸酯酶显色。

• 请在使用前按比例将溶液A和溶液B充分混合，新鲜配制。
  
• 请使用完后将溶液A、溶液B、显色缓冲液和反应终止液的瓶盖旋紧，以防止溶液挥发和与空气中的成分发生化学反应。
  
• 推荐所配试剂的量适合于6×8cm的膜，如果膜较大请适当增加所配试剂的量，以便完全覆盖膜。
  
• 请正确配制Western Blot所需试剂，正确的膜转移，抗体的稀释和冲洗步骤，以保证能够显色和减少杂带的产生。
  
• 显色时间不要太长，否则会产生高背景，影响实验结果的分析。
  
• 请在实验时戴上一次性手套，溶液A和溶液B有刺激性并对人体有害。
  
• 产品中的保存条件及有效期均以未开封情况下计算，为了防止产品与空气接触发生化学反应影响产品性能，将未使用完毕的组分按存储要求保存同时建议开封后的组分尽快使用完毕。
  
• 本试剂只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等目的，由此产生的后果概不承担责任。

• 在免疫印迹(Western Blot)实验中，先将相应的AP(碱性磷酸酶)标记的二抗覆盖膜后，于37℃振荡器上振荡1~1.5h，再用1×TBST或者1×PBST洗涤膜3～4次，将膜转移到阴暗处。
  
• 显色前先取显色缓冲液2mL吸取到一个15mL的干净瓶子中，用双蒸水进行5倍稀释，再加入溶液A和溶液B各120μL，充分混合。
  
• 在阴暗处将10mL的混合液加入膜上并将膜覆盖。37℃振荡反应30min即可，这时有橘黄色或棕红色的条带出现。
  
• 加入10mL的反应终止液并将膜覆盖，振荡1min，用双蒸水冲洗条带3～4次。
  
• 30min内照像记录实验结果，否则所产生的颜色会渐渐褪去。